Beth yw'r gwahanol ffyrdd o drosglwyddo'r DNA tramor i'r bacteria?

Ar gyfer trosglwyddo'r DNA tramor i'r gell letyol, mae nifer o ddulliau ar waith. Mae dau gategori eang o drosglwyddo genynnau yn digwydd yn naturiol neu'n artiffisial gydag ymyrraeth ddynol.

Trosglwyddo Gene Llorweddol : Gellir ei ddiffinio fel trosglwyddo deunydd o un gell i'r gell arall heblaw cell rhiant i ferch.

Trosglwyddo genynnau fertigol: Yn hyn, mae'r trosglwyddiad genyn rhwng y rhiant-gell i'r ferch-gell.

Mae HGT [1] yn cynnwys trawsnewid, trawsosod a chyfuno.

Trawsnewid : Rydym yn eithaf cyfarwydd ag arbrawf Griffith a'i egwyddor drawsnewidiol. Gellir ei ddiffinio fel y nifer sy'n derbyn os yw'r DNA noeth a'i integreiddio i'r system facteria. Gwelir trawsnewid yn naturiol mewn planhigion, anifeiliaid a Bacteria. Gellir trawsnewid yn artiffisial gan weithredu dulliau penodol fel electroporation, dull balistig, dulliau cemegol ac ati.

Trawsnewidiad [2] : Mae'n debyg i drawsnewid. Ar gyfer celloedd ewcaryotig, defnyddir gair trawsnewid i ymwneud â chanser ac felly, mabwysiadir gair trawsffurfiad. Mae'r broses drawsnewid yn cynnwys y firws fel y cyfrwng ar gyfer trosglwyddo'r deunydd genetig i'r system ewcaryotig.

Cydweddiad : Mae'n broses sy'n digwydd yn naturiol mewn bacteria a procaryotau eraill sy'n hwyluso atgenhedlu rhywiol. Mae cydweddiad yn digwydd trwy ffurfio'r bont gyfathrach sy'n caniatáu i'r gell rhoddwr (gwryw) drosglwyddo'r deunydd genetig i'r gell sy'n ei dderbyn (benyw). Mae'r bont gyfathrach yn cael ei ffurfio gan pili (o'r enw sex pili) y ddau facteria. Sylwch: mae bacteriophages fel M13 yn defnyddio'r pili hyn i drosglwyddo eu deunydd genetig yn uniongyrchol i'r gell facteriol.

Mae'r dulliau trawsnewid a ddefnyddir gan beirianwyr genetig a biotechnolegydd ar gyfer trawsnewid y celloedd wedi'u dosbarthu'n fras i ddau gategori: Dulliau corfforol a chemegol.

1) Dulliau cemegol:

Triniaeth CaCl2: Byddai CaCl2 yn ansefydlogi'r gellbilen. Byddai'n rhwymo i'r DNA ac yn cynnwys gwefr negyddol y ffosffad. Felly, gall y DNA fynd i mewn i'r gell yn hawdd trwy'r ddeuaidd lipid. Mae CaCl2 yn achosi i'r DNA waddodi ar gam allanol y bilen lipid. Mae rhoi sioc gwres (42 ° C) i'r sampl yn cynyddu cynnyrch y trawsnewidyddion.

Triniaeth PEG: Ar gyfer celloedd planhigion, rydym yn defnyddio PEG yn lle CaCl2. Mae PEG yn 4000 o foleciwlau Da ac mae'n ansefydlogi'r bilen ac yn ffurfio cymhleth gyda'r DNA. Yna caiff y DNA ei gludo i'r gell yn hawdd.

Mae dulliau cemegol eraill yn cynnwys defnyddio dextrans DEAE, Liposomau, nanocarrwyr ac ati.

2) Dulliau corfforol:

Electroporation: Mae'n cynnwys defnyddio pwls trydan i gynhyrchu pores dros dro yn y bilen. Mae'n hawdd ymgorffori'r plasmidau bach a'r DNA trwy ddefnyddio dulliau cemegol, ond ar gyfer y moleciwlau DNA mawr, mae angen i ni ddefnyddio dulliau corfforol. Fodd bynnag, ar gyfer electroporation, dylai'r crynodiad fod yn uchel. Yn achos celloedd planhigion, mae'r gell wedi'i hamgylchynu gan yr haenau o polysacaridau a biomoleciwlau eraill fel hemicellwlos, Cellwlos, pectin ac ati. Felly, rydyn ni'n trin y gell ag ensymau fel hemicellwlos a seliwlos i gael gwared ar y wal gell a throsi'r gell i protoplast. Felly, gellir ffurfio pores yn y bilen yn hawdd a gellir trosglwyddo DNA i'r gell trwy electroporation.

http://www.scientzbio.com/s/

Dull biolegol [4] : Fe'i gelwir hefyd yn ddull bomio gronynnau, dull gwn gronynnau, neu gwn genynnau yn syml. Mae'r offeryn yn cynnwys microcarrwyr sy'n cynnwys metelau trwm fel Au, Ag, W ac ati. Mae'r gwn hefyd yn cynnwys disg rupture, plât sy'n cario microcarrwyr (wedi'i lwytho â DNA), plât stopio, ac o'r diwedd, plât dal celloedd . Pan fydd y gwn yn cael ei danio, mae'r nwy dan bwysau i'r gwn gan arwain at dorri'r ddisg rupture. Mae'r plât gyda'r microcarrier (gyda'r DNA) yn symud tuag at y plât stopio. Byddai'r microcarrier wedyn yn symud ac yn mynd i mewn i'r gell. Felly trosglwyddir y DNA yn uniongyrchol i'r gell. Fodd bynnag, mae rhai cyfyngiadau ar ddefnyddio gwn genynnau. Mae posibilrwydd o fewnosod gronynnau lluosog a'i gronni a all achosi gor-iselder y genyn neu'r genyn yn distewi.

http://www.scientzbio.com/gene-transduction-device/

Microinjections : Maent yn defnyddio pibed mân iawn i chwistrellu'r moleciwlau DNA yn uniongyrchol i gnewyllyn y gell i'w drawsnewid. Fe'i defnyddir ar gyfer celloedd planhigion ac anifeiliaid.

Nodyn: Byddwn yn gwerthfawrogi eich cywiriadau a'ch awgrymiadau os yw'r data'n amherthnasol.

Cyfeiriadau a Darlleniadau Pellach

Brown, TA, 2016. Clonio genynnau a dadansoddi DNA: cyflwyniad. John Wiley & Sons.

Wolff, JA, Malone, RW, Williams, P., Chong, W., Acsadi, G., Jani, A. a Felgner, PL, 1990. Trosglwyddo genynnau yn uniongyrchol i gyhyr y llygoden yn vivo. Gwyddoniaeth, 247 (4949 Rhan 1), tt.1465-1468.

Lorenz, MG a Wackernagel, W., 1994. Trosglwyddo genynnau bacteriol trwy drawsnewid genetig naturiol yn yr amgylchedd. Adolygiadau microbiolegol, 58 (3), tt.563-602.

Lurquin, PF, 1997. Trosglwyddo genynnau gan electroporati