Sut i ddefnyddio gwn genyn

1. Paratoi deunydd

Gosodwyd haen denau o ganolig ar ddysgl ddiwylliant 9 cm2, a chafodd y deunydd (fel arfer embryonau anaeddfed, embryonau aeddfed, callws bach, celloedd crog, protoplastau, ac ati) eu plât yng nghanol y ddysgl gyda diamedr o 3 cm .

2, trin powdr aur

Cymerwch bowdr aur neu bowdr twngsten 60mg mewn tiwb allgyrchydd, ychwanegwch 1ml ethanol absoliwt, ysgwyd yn dda am 3min, centrifuge ar gyfer 1rain ar 9615g, tynnwch yr uwchnant, ychwanegwch 1ml o ddŵr di-haint a'i gymysgu'n dda, centrifuge ar 9615g, ailadroddwch gam 3 uchod. Amseroedd. Yn olaf, cafodd y powdr aur ei atal mewn 1 ml o ddŵr distyll di-haint a'i storio ar dymheredd 4 'C neu ar dymheredd ystafell.

3, prosesu DNA

Atal 50dA powdr aur, ychwanegwch 5ed plasmid DNA (1.0 / lg ~ 1) hydoddiant, 50 // l

Spermidine 0.1 mol / L (cafodd yr hydoddiant a ddefnyddiwyd ei sterileiddio yn ddi-haint), wedi'i ysgwyd am 3 munud, ar ôl ar dymheredd ystafell am 10 munud, wedi'i ganoli ar 9615 g am 10 s, taflwch yr uwch-arolygydd; ychwanegwch 250 ~ 1 ethanol absoliwt, ysgwyd i Allgyrchydd ar 9615 g am 10 s a thaflwch yr uwch-arolygydd. Ail-wariwyd y pelen mewn 60/1 1 o ethanol absoliwt a'i ddefnyddio ar gyfer 5 ergyd (10 i 1 y ergyd).

4, gweithrediad y gwn genyn

Mae holl weithrediadau'r gwn genyn yn cael eu perfformio o dan gyflyrau aseptig, fel a ganlyn:

1) Diheintio arwyneb y gwn genyn a'r siambr sampl gyda 70% ethanol. Ar yr un pryd, cafodd rhwyd y rhwystr a'r ddisg glyfar, y cludwr micro-elastig, ei ddeiliad a'r offeryn gosod eu socian am 15 munud gyda 70% o ethanol, ac yna eu rhoi ar fainc lân i sychu. Gall y diaffram holltadwy, y clawr sefydlog, a'r ddyfais lansio cludwyr micro-elastig gael eu sterileiddio ar yr wyneb gyda 70% ethanol a'u chwythu yn sych.

2) Rhowch y sleid microparticle yn y cylch cadw, ac ychwanegwch gymysgedd o DNA a phowdr aur at ganol y sleid microparticle a'i sychu am tua 1 munud.

3) Gosodwch y bilen rwthadwy ar ei ddeiliad a'i throi'n glocwedd ar y cyflymydd nwy.

4) Gosodwch y cylch gofod, y rhwyd blocio, y deiliad rhwyd blocio, y cludwr gronynnau a'r cylch gosod (sy'n wynebu'r gronynnau sy'n wynebu i lawr), tynhewch y clawr, a'i roi yn y grab.

5) Rhowch y sampl yn y siambr bomio a chau'r drws.

6) Agorwch brif falf y silindr heliwm a throwch falf y rheolydd heliwm yn glocwedd fel bod arwydd y pwyntydd medrydd pwysedd yn uwch na phwysedd y diaffram 200Psi (= 1.379MPa).

7) Troi'r switsh genyn a'r switsh trawsnewidydd ymlaen.

8) Pwyswch y botwm gwactod. Pan fydd y gwactod yn 26-28in Hg (= 88.05 ～ 94.82kPa), pwyswch y botwm Dal yn gyflym, yna pwyswch a daliwch y botwm lansio a'i gadw nes iddo gael ei actifadu.

9) Pwyswch yr allwedd fent i ailosod y sampl ar ôl i'r tabl gwactod gael ei sero.

10) Caewch i lawr.

Tynhau prif switsh y silindr heliwm, taro gwn gwag, dychwelyd pwyntydd y mesurydd pwysedd i sero, yna cylchdroi'r falf addasiad mesur pwysedd yn wrthglocwedd; diffoddwch brif switsh y gwn genyn a'r switsh trawsnewidydd.