Problemau cyffredin pan fydd homogenizer uwchsonig yn torri Escherichia coli

Mae E. coli yn mynegi protein tramor. Pan gaiff ei swyno, caiff ei atal mewn PBS sy'n cynnwys 1% triton-X-100. Mae'r effaith ultrasonic yn well. Mae effaith 1% triton-X-100 yn dal yn amlwg. Gwaith, fel Streptomyces.

Mae dyddodiad bacteriol yn ychwanegu sampl 1buffer yn uniongyrchol, ychwanegwch 5ml o mercaptoethanol, cymysgwch, allgyrchydd, berwch ar gyfer camau 10min, llwyth uniongyrchol, staenio a dadwisgo fel a ganlyn: rhowch y glud i mewn i'r swm priodol o liwio yn y popty microdon am 1min mae toddiant yn cael ei ddisodli gan swm mawr Gall y dŵr gael ei goginio yn y microdon am 10 munud.

Ar ôl mynegi'r protein ailgyfunol, cafodd y celloedd eu tarfu gan don ultrasonic, gan ddefnyddio bath iâ, 400W, a stopiodd 2S ar gyfer 1S, ond cynhyrchwyd llawer iawn o ewyn mewn amser byr, a effeithiodd ar effeithlonrwydd gwasgu. Yr oedd yr un fath â pbs a byfferau tris, ac yn olaf roedd y mathru'n anghyflawn. Ond mae fy mhrotein targed yn y celloedd di-dor hyn, sy'n golygu na allaf gael canlyniadau arbrofol.

Gadewch i mi roi dadansoddiad i chi o pam mae'r sefyllfa hon a'r ateb.

1. Cynhyrchir swigod oherwydd nad yw eich safle chwiliedydd wedi'i osod yn dda, rhaid i'r stiliwr fod yn agos at y gwaelod, tua 1cm (fel arfer 0.5cm o'r gwaelod), bydd gan yr offeryn lefelau pŵer gwahanol, ond gallwch arsylwi'r Mae yna amrywiadau ond peidiwch â bod yn rhy ymosodol.

2. Mae Super 3S yn stopio 10S, uwchsain tua 20 gwaith i weld yr effaith

3. Talwch sylw i safle'r corn. Os nad ydych chi'n gywir, dylech ei addasu mewn pryd. Yn ogystal, o safbwynt crynodiad y bacteria, ceisiwch gynyddu'r cyfaint wrth wasgu, ni ddylai'r cryfder fod yn fwy na 60%.

4. Rhowch gynnig ar 8S am Super 8S. Ar gyfer rhai proteinau bacteriol, mae eich dull yn anodd ei wasgaru gwres, gan arwain at ddadmeriad protein a chynhyrchu swigod. Mae'n well oedi am ychydig yn hwy. Mae hyn yn fwy cyffredin ar ffurf cyrff cynhwysiant.