Cwestiynau cyffredin am gelloedd sydd wedi torri

1. E. coli yn mynegi brotein tramor. Pan sonicated, caiff ei atal yn PBS sy'n cynnwys 1% triton-X-100. Effaith uwchsain yn well. Effaith 1% triton-X-100 yn dal yn amlwg. Mae rhai bacteria eraill hefyd yn gweithio, megis Streptomyces. Ar ôl mynegi y protein ailgyfuno, oedd y celloedd yn amharu gan gell uwchsonig aflonyddwch, defnyddio baddon iâ, 400w, a gwasgu ar gyfer 2s ar gyfer 1s, ond oedd yn swm mawr o ewyn a gynhyrchir mewn amser byr, a effeithiodd ar y pŵer arteithiol. Byfferau pbs a tris oedd fel hyn. Yw darnio anghyflawn, a phrotein targed mewn celloedd hyn heb ei thorri, beth ddylwn ei wneud?

Dadansoddiad: bydd y swigen yn cael ei gynhyrchu oherwydd nid yw'r sefyllfa holwch mewn sefyllfa dda; Holwch y rhaid fod yn agos at y gwaelod, am 0.5 1 cm; Bydd y pŵer yn amrywio yn ôl yr offeryn, ond gellir arsylwi ar y lefel hylif, ceir amrywiad ond nid rhy gryf; Gallwch ddewis celloedd uwchsonig mathru y torri ar gyfer 3s am 10s ac wedi torri am 20-30 gwaith. Dylid hefyd nodi sefyllfa y corn. Os yw sŵn yn anghywir, dylid addasu'r mewn amser; ystyried y crynodiad o facteria. Geisio cynyddu cyfaint pan gwasgu, cryfder y Zui mwy na 60%; Ceisiwch egwyl plant 8 ar gyfer plant 8, ar gyfer rhai proteinau bacterol, mae'n anodd i leddfu protein i achosi denaturation protein cynhyrchu swigod, y gall fod wedi rhewi am ychydig yn hwy. Protein yn y ffurf o gyrff cynhwysiant.

2. Beth yw'r amodau ar gyfer sonication Streptomyces (actinomycetes)?

Dadansoddol: Mae actinomycetes yn perthyn i (G + C) molar canran (môl %) y grŵp branching Gram-positive (Eubacteria) ar y goeden phylogenetic prokaryotic system, ac sydd â nodweddion molecwlaidd a biolegol unigryw i prokaryotes. Fodd bynnag, yn ei gwahanol grwpiau, mae cyfansoddiad cemegol y wal cell yn amrywio'n fawr. Yn uwchsain E. coli, defnyddir 400W, ac mae'r dull o dorri 5s ar gyfer plant 5 oed yn effeithiol, ond defnyddir ar Streptomyces, ac mae unrhyw effaith oherwydd y gwahaniaeth yng nghyfansoddiad y wal cell. Mae triniaeth cyn-nyddu o Streptomyces (actinomycetes) yn gyffredinol wedi'i ffurfweddu i grynodiad o atal bacteria. Mae amodau penodol ar gyfer y gwasgu gan ddefnyddio amharu drwy gell uwchsonig: casglu y bacteria yn y toddiant diwylliant 24 h ar 5 000 r / min am 5 munud i gasglu y celloedd; golchi â pH 7.5 Na2HPO-Lluniwyd clustogi NaH2PO 3 gwaith, ac yna i'r celloedd i 1:3 bacterol atal dros dro gan ddefnyddio y parth clustogi. Gosod yn 40 mL mawr plastig tiwb profi; gosod tiwb prawf plastig mawr mewn baddon iâ a gwasgu â disrupter gell uwchsain (pŵer 200W, 1/2"Holwch, gwasgu ar gyfer 30au, ysbeidiol 30au ar y pryd); gwasgu ateb yn 12 000 r/min Centrifuge yn ar gyflymder uchel 30 min, gell casglu malurion a supernatant. Gellir golchi celloedd hefyd golchi unwaith gyda heli cyn oeri neu Tris HCl ar pH 8. Yn ogystal, mae y dos uwchsonig yn amrywio'n fawr ar faint o sampl a bacteria. Gall y pŵer fod yn 400-600w, eu gwasgu ar gyfer plant 5 oed, stopio ar gyfer plant 5 oed, baddon iâ, ac yn y crynodiad terfynol o 1 mM PMSF ychwanegir. Er mwyn pennu dwysedd uwchsonig priodol a pha mor aml, mae'n angenrheidiol i weld a bacteria yn llwyr wedi torri ar unrhyw adeg.